苯丙氨酸解氨酶 （生成反式桂皮酸所需酶）

　　苯丙氨酸解氨酶生成反式桂皮酸所需酶苯丙氨酸解氨酶（phenylalanineammonialyase，PAL）催化苯丙氨酸的脱氨反应，使NH3释放出来形成反式肉桂酸。此酶的在植物体内次生物质（如木质素等）代谢中起重要作用。

　　中文名:苯丙氨酸解氨酶

　　英文名:phenylalanine ammonialyase

　　存在部位:高等植物、酵母、菌类可溶性部分

　　发现时间:1961年在大麦中发现的

　　简介是催化直接脱掉L-苯丙氨酸上的氨而生成反式桂皮酸的酶。EC。4.3。1.5。是1961年J。Koukol，E。Conn在大麦中发现的。存在于高等植物、酵母、菌类的可溶性部分。推测分子量为30万。这是一个可把苯丙氨酸用于酚类化合物合成的酶。在很多情况下，其反应成为酚类化合物合成的有步骤的速率阶段。

　　在组织中的活性可随外界因素而发生显著变化，用光照，病伤害，植物激素处理等会使活性显著增加。另外有时还受光敏色素所支配。在多数情况下，在组织中活性增加的同时，酶发生失活作用，这时组织中具有活性酶的量很快就会减少，据认为，这种失活是与类蛋白质物质作用有关。此外也已指出有非活性的酶的存在。

　　活性测定原理

　　苯丙氨酸解氨酶（phenylalanineammonialyase，PAL）催化苯丙氨酸的脱氨反应，使NH3释放出来形成反式肉桂酸。此酶的在植物体内次生物质（如木质素等）代谢中起重要作用。根据其产物，反式肉桂酸在290nm处吸光度的变化可以测定该酶的活性。

　　材料、仪器设备及试剂

　　（一）材料：马铃薯块茎

　　（二）仪器设备：1。紫外分光光度计；2。离心机；3。研钵；吸滤瓶；5。红光装置；6。打孔器。

　　（三）试剂：1.0。05mol/L硼酸盐缓冲溶液（pH8.8）；2.0。02mol/L苯丙氨酸（用0.1mol/LpH8.8硼酸缓冲液配制）；3.5mmol/L巯基乙醇硼酸缓冲液。

　　实验步骤

　　马铃薯圆片制备将马铃薯块茎洗净、削皮，用打孔器（直径1.5cm）取圆柱，切除两头近表皮处，中间部分切成2mm厚的圆片。先用自来水漂洗，最后用蒸馏水洗一次，用纱布吸干表面的水。

　　2。光诱导将圆片平铺在湿润滤纸的培养皿中，置20～30℃红光下处理24h以诱导PAL（也可接种病原菌诱导等）。

　　3。酶粗提液的制备

　　经诱导处理的马铃薯圆片5g，加10ml含5mmol/L的巯基乙醇的硼酸缓冲液、0.5g聚乙烯吡咯烷酮（PVP）或PolyclarAT（除去酚类物质毒害，防止颜色的干扰、少量石英砂在研钵中研磨。匀浆抽气过滤，滤液10，000rpm离心15min，上清液为酶粗提液。上述操作均在0～4℃下进行。

　　。活性测定与计算

　　1ml酶液加1ml0.02mol/L苯丙氨酸，2ml蒸馏水，总体积为4ml。对照不加底物，多加1ml蒸馏水；反应液置恒温水浴30℃中保温，0.5h后用紫外分光光度计在290nm处测定吸光度。以每小时在290nm处吸光度变化0.01所需酶量为一单位（相当每毫升反应混合物形成1μg肉桂酸）。蛋白质含量用Folin－酚法进行测定。

　　参考资料

　　1。苯丙氨酸解氨酶（PAL）活性的测定·丁香通

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